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rtshdjcsjuv · Wysłany: Wto 14:59, 01 Mar 2011 Temat postu: 转RGSV—SP基因&#2

转RGSV—SP基因水稻植株的再生
ing@126corn病毒学第19卷增强杂交信号。以所提取的总RNA为模板反转录成cDNA，再进行PCR扩增，以扩增的产物进行点杂交，实验结果很明显。对随机挑取的8株经Southern点杂交检测为阳性的转化植株进行检测，结果表明在所检测的植株中有些植株未显色(图5中的8、9)其余的均为阳性反应(图5中的2--7)，这表明转入的基因已在植株体内进行了转录。而其中未显色的植株则可能发生了转录水平的沉默。I23456789l0囊謦_÷豢粤蘩警瞻图5RT—PCRSouthern点杂交检测基冈的转录Fig．5ThetranscriptionsofthespgeneofregeneratedPlantsdetectedbyRT—PCRSouthernblothybridization1，Positivecontrol；2-9，Transgenicplants：10．Negativecontrol3讨论农杆菌介导法进行外源基因转化时，感染后共培养的时间对转化影响较大，…一般培养3d效果较好。在实验中发现菌液浓度及用滤纸吸菌的程度均会影响共培养中农杆菌的生长情况。若菌的浓度过大或菌吸得不干，共培养时菌会过多生长而不利于再生。另外，如何选择适当的筛选标记以准确有效地区分转化与非转化细胞，产生选择压力，使未转化细胞不能生长，又不干扰细胞的正常生长与植株再生也是转化关键的一步。张春嵋曾用卡那霉素进行抗性筛选I6】，但没有再生出植株。在本研究中用G418进行抗性筛选，与卡那霉素相比，愈伤组织再生植株的频率较高。在检测sp基因转录时发现了有些植株发生了转录水平的基因沉默，这种现象已早有报道，可能是因为启动子的甲基化或多拷贝重复序列等【71。本研究通过农杆菌介导的手段将RGSVsp基因转入水稻中，Southem杂交证实目的基因己整合到水稻基因组中，并能正常转录，从而为研究RGSVp基因在水稻中的作用及病毒与寄主互作机制奠定了坚实的基础。致谢：张春嵋博士提供植物表达载体，魏太云博士对本试验提出宝贵意见，特此致谢。
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